2012年《医学检验考试》辅导：酶免疫技术

酶免疫技术的特点

酶免疫技术是利用酶催化底物反应的生物放大作用，提高特异性抗原-抗体免疫学反应检测敏感性的一种标记免疫技术。

（1）酶和酶作用的底物：

①辣根过氧化酶（HRP）：是一种糖蛋白，含糖量约18%；分子量为44kD；是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而成的一种卟啉蛋白质。主酶为无色糖蛋白，在275nm波长处有最高吸收峰；辅基是深棕色的含铁卟啉环，在403nm波长处有最高吸收峰。在反应中H2O2是受氢体底物，DH2无色的供氢体底物，在HRP的催化下脱氢而显色，此即HRP作为示踪物的原理。

②碱性磷酸酶（AP）：是从牛肠粘膜或大肠杆菌中提取。从大肠杆菌提取的最适pH为8.0；用小牛肠粘膜提取的AP最适pH为9.6.

③其他的酶：有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和脲酶等。

（2）酶标记的抗体或抗原：

称为结合物。制备方法通常有戊二醛交联法（包括有一步法和二步法）和过碘酸盐氧化法。标记抗体的最佳用量：通常采用棋盘滴定法进行滴定。

（3）固相载体：

主要试剂：固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联的酶反应底物。可作固相载体物质最常用的是聚苯乙烯。与聚苯乙烯类似的塑料为聚氯乙烯。聚苯乙烯作为ELISA固相载体，载体还包括微孔滤膜和含铁磁性微粒。聚氯乙烯板的特点为质软板薄，可切割，价廉、但光洁度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有时也略高。

（4）免疫吸附剂：

固相的抗原或抗体称为免疫吸附剂。将抗原或抗体固相化的过程称为包被。如在包被后再用l%～5%牛血清白蛋白包被一次，可以消除这种干扰。这一过程称为封闭。包被好的ELISA板在低温可放置一段时间而不失去其免疫活性。